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台式低速冷冻离心机提取细胞质和核蛋白的离心详细步骤
台式低速冷冻离心机提取细胞质和核蛋白的离心详细步骤
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台式低速冷冻离心机提取细胞质和核蛋白的离心详细步骤
台式低速冷冻离心机用于实验室对生物大分子、沉淀物等进行初步分离提取,其旋转头主要采用铝合金制成,有平板式和角式两种。离心管由硬质玻璃、聚乙烯硬质塑料和不锈钢管制成。离心机配有驱动电机、定时器、调节器(转速表)和制冷系统(可调温度范围-20~40℃),可根据需要更换不同容量、不同型号转速的旋转头。以满足离心物料的需要。
台式低速冷冻离心机提取细胞质和核蛋白的离心详细步骤:
1. 确定细胞生长状态。细胞生长状态应为 80% 或更好:
2. 1500r/min离心5min
3. 弃去上清,用等体积的冷PBS洗涤细胞,重复步骤2 3次
4、根据预计的沉淀量,向细胞颗粒中加入5倍体积的等渗sisbuffer,使细胞轻柔悬浮,尽量避免产生泡沫
5. 悬浮细胞中加入裂解缓冲液,冰上放置15min,使细胞膨胀,可在显微镜下观察
6. 对于细胞实验中扩增的细胞,添加10% IGEALCA-630,使终浓度达到0.3%,混匀,轻轻添加
7、立即离心(大量使用1.5ml EP管5500r/min 30s;大量使用50ml管5500r/min 2min)
8. 将上清液(细胞质蛋白)转移至新的冷冻管中
9. 用 5 倍悬浮颗粒体积的等渗缓冲液悬浮细胞并充分混合
10. 1500r/min离心细胞悬液5min,去除上清液
11. 用 2/3 倍提取缓冲液体积悬浮颗粒
12、将试管置于振动混合器上,以700r/min振荡混合15min,然后以1400r/min振荡混合15min。整个过程要小心,避免产生泡沫
13. 9400r/min离心15min,低温离心后将上清转移至新的冷冻离心管中
14、分成几份用液氮冷冻保存(长期保存-80℃,短期保存-20℃)
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