台式低速冷冻离心机提取细胞质和核蛋白的离心详细步骤-浙江汉康医疗科技有限公司

台式低速冷冻离心机用于实验室对生物大分子、沉淀物等进行初步分离提取，其旋转头主要采用铝合金制成，有平板式和角式两种。离心管由硬质玻璃、聚乙烯硬质塑料和不锈钢管制成。离心机配有驱动电机、定时器、调节器（转速表）和制冷系统（可调温度范围-20~40℃），可根据需要更换不同容量、不同型号转速的旋转头。以满足离心物料的需要。

台式低速冷冻离心机提取细胞质和核蛋白的离心详细步骤：

1. 确定细胞生长状态。细胞生长状态应为 80% 或更好：

2. 1500r/min离心5min

3. 弃去上清，用等体积的冷PBS洗涤细胞，重复步骤2 3次

4、根据预计的沉淀量，向细胞颗粒中加入5倍体积的等渗sisbuffer，使细胞轻柔悬浮，尽量避免产生泡沫

5. 悬浮细胞中加入裂解缓冲液，冰上放置15min，使细胞膨胀，可在显微镜下观察

6. 对于细胞实验中扩增的细胞，添加10% IGEALCA-630，使终浓度达到0.3%，混匀，轻轻添加

7、立即离心（大量使用1.5ml EP管5500r/min 30s；大量使用50ml管5500r/min 2min）

8. 将上清液（细胞质蛋白）转移至新的冷冻管中

9. 用 5 倍悬浮颗粒体积的等渗缓冲液悬浮细胞并充分混合

10. 1500r/min离心细胞悬液5min，去除上清液

11. 用 2/3 倍提取缓冲液体积悬浮颗粒

12、将试管置于振动混合器上，以700r/min振荡混合15min，然后以1400r/min振荡混合15min。整个过程要小心，避免产生泡沫

13. 9400r/min离心15min，低温离心后将上清转移至新的冷冻离心管中

14、分成几份用液氮冷冻保存（长期保存-80℃，短期保存-20℃）

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